1、樣品準備:確保待測樣品無污染、無沉淀,并按照說明書要求進行稀釋。對于血清或血漿樣品,建議使用無菌離心管進行分離,并在2小時內完成檢測。如果需要保存,應將樣品分裝在無菌離心管中,放置于-80°C冰箱中保存,避免反復凍融。
2、標準品配制:根據說明書要求準確配制標準品,建議使用專用的標準品稀釋液進行稀釋。標準品的濃度范圍應覆蓋待測樣品的預期濃度范圍。
3、洗滌:在每次加入試劑前,務必對微孔板進行充分洗滌,以去除非特異性結合。洗滌時應使用專用的洗板緩沖液,并按照說明書要求進行洗滌次數和時間。
4、顯色劑的使用:顯色劑在使用前應達到室溫,并避免陽光直射。顯色劑的加入量和反應時間應嚴格按照說明書要求進行,以免影響檢測結果。
5、終止反應:終止反應后,應在15分鐘內讀取吸光度值。終止液的加入量和反應時間應嚴格按照說明書要求進行。
6、讀數:使用酶標儀讀取各孔的吸光度值時,應保證微孔板清潔、無劃痕,并避免氣泡的產生。同時,應設置空白對照孔,用于校正儀器的零點。
7、數據處理:根據標準曲線計算出待測樣品的濃度值,并進行適當的統計分析。如發現異常數據,應及時排查原因并重新進行實驗。
8、大鼠ELISA試劑盒實驗操作過程中的其他注意事項:
a.在實驗過程中,盡量避免頻繁開啟,以免試劑受潮或污染。
b.在實驗過程中,應避免直接接觸試劑,以免對實驗人員造成危害。
c.在實驗過程中,應避免使用過期的,以免影響實驗結果。
總之,在使用大鼠ELISA試劑盒時,應嚴格遵循說明書的操作步驟和要求,注意實驗過程中的各種細節,以確保實驗結果的準確性和可靠性。同時,實驗人員還應具備一定的實驗技能和經驗,以便更好地應對實驗過程中可能出現的問題。