293 HEK-293 (胚腎細胞)說明書

產品屬性：

產品名稱：293 [HEK-293] (胚腎細胞)

規格：1×10?cells/T25培養瓶

生長培養基：MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

名稱293 [HEK-293] (人胚腎細胞) (STR鑒定正確)

別稱Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Human Embryonic Kidney 293

背景描述293 [HEK-293]細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉染的人胚腎細胞形成的永生化細胞，293 [HEK-293]細胞包含并表達轉染的Ad5基因。早期報道中指出，293 [HEK-293]細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側端和右側端的DNA，但是現在明確了只存在其左側端的DNA。經過對Ad5的插入點的克隆測序發現，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細胞19號染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主，可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。

種屬人

年齡（性別）胚胎

組織來源腎；以腺病毒5DNA進行轉化

生長特性貼壁細胞

細胞形態上皮細胞樣

細胞類型轉化細胞系

生物安全等級2

生長培養基MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~24-30 hours

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO?，5%

溫度：37℃

致瘤性Yes, forms tumors in nude mice.

受體表達情況vitronectin

注意事項該細胞貼壁松散，操作時請盡量輕柔；換液時需預熱培養基；收貨如有大塊脫落的細胞團，為正?，F象，請按照收貨注意事項處理。

冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

小鼠β內啡肽(β-EP)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)elisa檢測試劑盒    用途：僅供科研

人Ⅰ型膠原交聯羧基末端肽(ⅠCTP)elisa檢測試劑盒    用途：僅供科研

小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)elisa檢測試劑盒    用途：僅供科研

人轉酶2C多肽(TGM2)elisa檢測試劑盒    用途：僅供科研

小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

人粘蛋白/粘液素7(MUC7)elisa檢測試劑盒    用途：僅供科研

小鼠體(TR)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠抗TR)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠P)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠FⅩ)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠Ⅸ)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠g)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠大內皮素(BigET)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠白介素27(IL-27)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒    用途：僅供科研

人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA試劑盒    Human cutaneous T cell-attracting chemokine, CTACK Elisa Kit    96T/48T

人胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14)ELISA試劑盒    Human Breast and kidney expressed chemokine, BRAK Elisa Kit    96T/48T

人B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒     Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1, BLC-1 Elisa Kit    96T/48T

人結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒     Human connective tissue-activating peptide Ⅲ, CTAPⅢ Elisa Kit    96T/48T

a Kit    96T/48T

Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E, FcεRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ  Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒     Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit     96T/48T

人粒細胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA試劑盒    Human granulocyte chemotactic protein-2, GCP-2 Elisa Kit     96T/48T

人糖基化依賴的細胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA試劑盒     Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1, GlyCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

人干擾素調節因子(IRF)ELISA試劑盒     Human interferon Regulatory Factor, IRF Elisa Kit    96T/48T

人淋巴毒素β(LTB)ELISA試劑盒     Human lymphotoxinβ, LTB Elisa Kit    96T/48T

人淋巴毒素α(LTA)ELISA試劑盒     Human lymphotoxinα, LTA Elisa Kit    96T/48T

人CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA試劑盒    Human CC-chemokine receptor 1, CCR1 Elisa Kit    96T/48T

293 [HEK-293] (胚腎細胞)說明書人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA試劑盒    Human CX3C-chemokine receptor 1, CX3CR1 Elisa Kit    96T/48T

人肺部活化調節趨化因子(PARC/CCL18)ELISA試劑盒     Human pulmonary activation regulated chemokine, PARC Elisa Kit    96T/48T

人黏膜地址素細胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA試劑盒    Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1, MAdCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

人β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒    Human Interferon β, IFN-β/IFNB Elisa Kit     96T/48T

人可溶性CD38(sCD38)ELISA試劑盒    Human Soluble Cluster of differentiation 38, sCD38 Elisa Kit    96T/48T

培養操作:

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。